| 液相色谱分析实验
来源：分析测试中心 发布时间：2013-11-29 一、实验目的
1、了解并熟悉高效液相色谱仪的流程。 2、掌握液相色谱定性和外标定量方法。 二、实验原理 高效液相色谱法是利用待测样品的分子结构，极性，及分子量的不同，其在液体的流动相与固态的固定相之间的平衡分配系数也不相同。使得它们在色谱柱上的移动速率有差别，故在色谱柱上待测样品由混合样被分离成各个单个组分，再由紫外，荧光，示差等检测器对被分离的成分进行检测，经色谱工作站对数据进行定性定量分析的方法。 分析流程： 高效液相色谱仪一般具有储液器，高压泵，梯度洗脱装置，进样器，色谱柱，检测器，数据处理器等组成。 在反相系统里, 固定相是非极性的, 流动相是极性的。在化学键和相色谱中, 反相固定相的配合基常是链长2—18碳原子的烷基。流动相一般为极性有机溶剂和水的混合溶液。溶质极性越大, 保留值越小。当流动相组成一定时, 样品在较长烷基配合基的固定相上的保留值较大。 定性分析则根据已知标准样与未知样之间的相对保留时间相比较。定量分析则用外标法，外标法即标准曲线法，先配制不同浓度欲定量组分的标准溶液，测量各组分的峰面积，然后用峰面积对浓度作出标准曲线。再测量出未知样的峰面积，即可计算出未知样的浓度。 三、实验条件： 色谱仪：日立638—50高效液相色谱仪。 色谱柱；spherisorb C18 5um [4.6ⅹ200mm] 流动相：甲醇—水：85—15 流速：1.0ml/min 检测器：UV—254nm 温度：室温 数据处理器：EChorm98色谱工作站。 萘标准溶液浓度：20ug/ml、40ug /ml、60 ug /ml 四、实验内容 1、分别称取适量的萘标准品于100ml 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。 2、取适量苯、萘、联苯混合样品于100ml容量瓶中作为未知样。 3、首先打开主机总开关，然后依次打开紫外检测器，脱气器及色谱工作站的电源开关。 4、在主机的操作板上，打开手动开关。分别输入流速参数，浓度参数，压力上下限值，最后启动黄色的泵开关。将监视器定位在压力表上，观察压力值。 5、调整检测器波长在254nm处，然后定位零点。观察色谱工作站中色谱图基线情况， 6、待基线平稳后，用微量进样器分别取5ul标准溶液，由进样阀进样， 同时记录色谱图和保留时间。 7、取未知样品5ul进样，记录色谱图和保留时间 。 五、数据处理 1、根据得到的标准曲线色谱图与保留时间，在未知样品谱图中确定萘的峰， 2、求出回归方程和相关系数。 3、用外标法计算未知样品的浓度。 六、问题讨论 1、高效液相色谱方法分为几类？ 2、效液相色谱的定量方法有那几种？ |
